Лабораторные методы исследования кандидоза

Сегодня человечество переживает эпидемию оппортунистических инфекций, среди которых микозам принадлежит одно из ведущих мест. По данным Всемирной Организации Здравоохранения в последнее десятилетние около 20% населения мира страдает микозами.

Микозы – инфекционные заболевания, этиологическим возбудителем которых являются микробов. Чаще всего микозом болеют люди, имеющие первичные или вторичные иммунодефицитные состояния. Микоз относится к оппортунистическим инфекциям.

Кандидоз – антропонозный микоз, характеризующийся поражением слизистых оболочек и кожи.

Возбудители кандидоза. Поражения у человека вызывают С. albicans (более 90% поражений), С. tropicalis, С. krusei, С. lusitaniae, С. parapsilosis, С. kefyr, С. guilliermondii и др. В начале XX в. кандидозы наблюдали сравнительно редко. С началом применения антибиотиков и по настоящее время заболеваемость кандидозами значительно возросла и продолжает расти. Немаловажное значение в развитии кандидозов имеет неблагоприятная экологическая обстановка, оказывающая отрицательное воздействие на иммунную систему организма человека. Кандидоз обычно возникает эндогенно в результате дисфункций иммунной системы и дисметаболических расстройств организме. В последние годы кандиды являются наиболее распространёнными возбудителями оппортунистических микозов. При поражении организма кандидами возможно развитие тяжёлых висцеральных форм, чаще с вовлечением лёгких и органов пищеварения и других систем организма.

Наиболее часто встречающийся возбудитель микозов С. albicans – нормальный комменсал полости рта, ЖКТ, влагалища и иногда кожи. С. Albicans относятся к условно-патогенным микроорганизмам с высоким уровнем носительства, которое проявляет выраженную тенденцию увеличения: если в 20-е годы оно составляло на слизистой ротовой полости 10%, то в 60 – 70-е годы возросло до 46 – 52%. На слизистой влагалища небеременных женщин носительство иногда достигает 11 – 12,7% и резко увеличивается в последней трети беременности, составляя по данным разных авторов 29,3 – 46 – 86%. В фекалиях частота выделения грибов рода Candida достигает 80%, на неповрежденной коже – до 9,5%. Общий уровень носительства этого вида грибов формируется к 16 – 18-летнему возрасту, оставаясь в дальнейшем без существенных изменений.

Во многих исследованиях показано, что любые нарушения резистентности организма или изменения нормального микробного ценоза могут приводить к развитию заболеванияКандидоза..

Мочеполовой кандидоз передаётся половым путём.

Первичное инфицирование организма человека кандидами происходит при прохождении через родовые пути матери, о чем свидетельствует высокая частота выделения Candida у новорожденных (до 58%), и почти полное совпадение видового состава Candida у ребенка и матери. Инфицированию способствует увеличенная частота носительства и кандидоза влагалища в последней трети беременности. Имеются сведения о передаче грибов рода кандида при кормлении грудью.

Кандидозный вульвовагинит у беременных развивается в 10 – 20 раз чаще, чем в контрольной группе. Предполагают, что беременность является предрасполагающим фактором в развитии кандидоза из-за иммуносупрессивного действия высокого уровня прогестерона и присутствия в сыворотке иммуносупрессивного фактора. Последующая колонизация организма ребенка происходит за счет предметов обихода, рук персонала и пищевых продуктов, в результате чего к концу 1 года почти у 60% детей формируется ГЗТ к антигенам C. albicans.

Новорожденные проявляют высокую чувствительность к экзогенному заражению: у 98,5% инфицированных детей на 5 – 6 день жизни развивается кандидоз ротовой полости. Прогноз заболевания благоприятный, за исключением недоношенных, у которых микоз может приобретать висцеральный и генерализованный характер.

Описан трансплацентарный путь заражения при кандидозе, прогноз которого зависит от степени доношенности: при рождении ребенка после 36 недель беременности заболевание, как правило, протекает в виде легко купируемых поверхностных поражений, а при рождении в более ранние сроки микоз принимает системный характер с высокой летальностью.

Поражение слизистых кандидами обусловлено тем, что C. albicans на слизистых обладает свойством активно прилипать к эпителию. Это свойство наиболее интенсивно выражено при 37 о и рН 7,3; довольно высокая степень адгезии отмечена и при слабокислых значениях среды (рН 6,0). Таким образом, условия организма способствуют активной колонизации слизистых C. albicans, где этот гриб на поверхности клеток размножается в виде дрожжевой фазы.

Патогенез. В патогенезе микозов наиболее важными факторами являются:

– нарушение целостности кожи и слизистых (ожоги, лучевая терапия, потертость и т.п.);

– длительное применение антибиотиков;

– нарушении гормонального баланса (сахарный диабет);

Грибы, паразитирующие на коже человека, питаются частицами эпидермиса, роговыми массами ногтевых пластинок, а продукты их жизни – белки – вызывают аллергическую реакцию.

Факторами патогенности грибов рода Candida являются его способность к адгезии и инвазии с последующим цитолизом ткани, а затем – и к лимфогематогенной диссиминации. Candida spp. способны к инвазивному процессу в слизистых оболочках, в первую очередь представленных многослойным плоским эпителием, и реже – однослойным цилиндрическим. Чаще всего инвазивный микотический процесс наблюдается в полости рта, пищеводе, в желудке и кишечнике.

Доказано, что даже без внедрения вглубь эпителия, Candida spp. могут вызывать патологию человека – неинвазивную форму кандидоза

Контакт поверхностных и корпускулярных антигенов гриба с имммуннокомпетентными клетками макроорганизма может привести к выработке повышенных количеств специфических IgE и сенсибилизированных лимфоцитов, что служит патогенетической основой для микогенной сенсибилизации. Аллергенами у Candida albicans являются и первичные метаболиты – алкогольдегидрогеназа и кислый P2-протеин.

Это потенциально опасно в плане развития микогенных аллергических заболеваний – специфической бронхиальной астмы, атопического дерматита, крапивницы.

Резорбция в кишечнике продуктов метаболизма грибов рода Candida его плазмокоагулаза, протеазы, липофосфорилазы гемолизин и эндотоксины могут вызвать специфическую интоксикацию и вторичный иммунодефицит.

Наконец, за счет взаимодействия с представителями облигатной нормобиоты и условно-патогенными микроорганизмами Candida spp. могут индуцировать дисбиоз и микст-инфекцию слизистых оболочек.

Ключевым фактором начала инфекционного кандидозного процесса является нарушение неспецифической и специфической резистентности организма, как на местном, так и на общем уровне.

К факторам неспецифической резистентности традиционно относят адекватный баланс десквамации и регенерации эпителиоцитов, мукополисахариды слизи, нормальную микробиоту слизистых оболочек, (Bifidumbacterium spp., Lactobacillus spp., Escherihia coli, Peptostreptococus spp.,), перистальтическую активность и кислотно-ферментативный барьер пищеварительного тракта. Показано например, что лечение больных препаратами, содержащими бифидобактерии, значительно снижает содержание грибов рода Candida в кале больных.

К неспецифическим факторам относят так же секреторный IgA, лизоцим, трансферрин, компоненты комплемента. Однако наиболее важны число и функция полиморфно-ядерных мононуклеарных фагоцитов, в частности их способность к хемотаксису, аттракции, килингу и презентированию грибкового антигена. Именно в условиях нейтропении развиваются жизнеугрожающие формы кандидоза, включая висцеральные поражения (печени, желчного пузыря, поджелудочной железы).

Специфический иммунный ответ при кандидозе представлен наработкой специфических противокандидозных антител классов IgA, IgG, IgM, инактивирующих ферменты инвазии и эндотоксины гриба, а также вместе с компонентами комплемента участвующими в опсонизации.

Конфликт между факторами патогенности гриба и факторами антифунгальной резистентности приводит к развитию той или иной формы кандидоза. Механизмы патогенеза двух принципиально различных форм кандидоза (инвазивного и неинвазивного) легли в основу классификации кандидоза кишечника. Для практических целей необходимо выделять три формы поражения.

Первая – инвазивный диффузный кандидоз кишечника, вторая – фокальный (вторичный при язве двенадцатиперстной кишки, при неспецифическом язвенном колите), третья – неинвазивный (так называемый кандидозный дисбиоз).

Отдельно выделяют перианальный кандидодерматит, обусловленный инвазией псевдомицелия микромицетов в кожу перианальной области. Однако основной симптом этого заболевания – рецидивирующий анальный зуд обуславливает большую частоту обращений не к дерматологу, а к гастроэнтерологу.

Клинические проявления микозов (кандидозов) могут быть различными в зависимости от их локализации.

Диареи. В последние годы является актуальной проблема осложнений антибиотикотерапии, и в первую очередь так называемой антибиотик-ассоциированной диареей (ААД). Согласно общепринятому определению ААД – это три или более эпизодов неоформленного стула в течение двух или более последовательных дней, развившихся на фоне применения антибактериальных средств.

Основными причинами развития ААД, развивающихся после применения антибиотиков , являются:

• Аллергические, токсические, и фармакологические побочные эффекты собственно антибиотиков.
• Осмотическая диарея в результате нарушения метаболизма желчных кислот и углеводов в кишечнике
• Избыточный микробный рост в результате подавления облигатной интестинальной микробиоты.

Симптомокомплекс, развившийся на фоне применения антибиотикотерапии, может варьировать от незначительного преходящего интестинального дискомфорта до тяжелых форм диареи и колита. Клинически выделяют три основных варианта заболевания:

Колонизации кишечника Candida spp. способствует лечение широкоспектральными антибиотиками с анаэробной активностью, применение третьей генерации цефалоспоринов, а так же антибиотиков с интенсивной концентрацией в кишечнике. Колонизация кишечника микромицетами может привести к кандидемии при наличии следующих факторов риска: массивная колонизация кишечника Candida spp., первичное повреждение кишечника, гипохлоргидрия желудка, снижение кишечной перистальтики, цитотоксическая химиотерапия.

Клинически поражение грибами кишечника может представлять собой носительство, неинвазивный микотический процесс и инвазивный кандидоз.

Клинические проявления роста микромицетов

… грибы рода Candida размножаются на любом биологическом субстрате.

Вначале производят исследование нативного материала (за исключением крови); при этом ликвор, мочу и желчь подвергают (!) предварительному центрифугированию (1500 – 2000 об/мин, 10 – 15 мин). Препараты готовят в 10 – 20% растворе щелочи при слабом нагревании.

Обнаружение нитчатой фазы возбудителя (мицелия или псевдомицелия) является важным свидетельством наличия кандидоза. Количество дрожжевых клеток в каждом поле зрения служит ориентиром при подготовке серийных разведений для количественного посева на плотные питательные среды: единичные клетки в поле зрения при большом увеличении микроскопа (х400) свидетельствуют об их содержании порядка десятков тысяч в 1 мл исследуемого материала.

Разведения патологического материала, содержащего нормальную микрофлору (мокрота, фекалии, моча, желчь и т.д.), готовят в жидкой питательной среде (обычно жидкое сусло или жидкая среда Сабуро) и затем высевают определенное количество материала (0,1 – 0,2 мл) на аналогичные плотные среды. Для подавления роста контаминирующих бактерий в среды добавляют антибактериальные антибиотики (чаще всего применяют пенициллин и стрептомицин: по 50 – 100 ед/мл среды или 0,05% хлорамфеникола).

Если вместо соскобов использованы смывы, то тампоны предварительно встряхивают в течение нескольких минут в 5 – 7 мл жидкой питательной среды, а затем производят посев на плотные среды определенного объема соответствующего разведения исходной взвеси. Соскобы с кожи и ногтевых пластинок помещают на скошенные питательные среды. Посев крови и ликвора производят в 10-кратный объем жидкой среды Сабуро или МПБ с 2% глюкозы без добавления антибиотиков, так как кандидозная фунгемия иногда сочетается с бактериальным сепсисом. Наиболее высокую эффективность выделения грибов из крови удалось обеспечить при использовании комбинированной сердечно-мозговой среды. Посев крови делают 3-4-кратно, осуществляя забор из разных вен с интервалом в несколько дней при (1) отсутствии парентерального питания или (2) капельного введения лекарственных веществ. При наличии у больного фунгемии рост грибов появляется через 24-48 ч, максимальная инкубация осуществляется до 30 суток при периодических пересевах на плотную питательную среду.

Биопсированный и секционный материал используют для приготовления гистологических препаратов (окраска PAS-методом), а остатки материала высевают (методом отпечатков или после предварительного измельчения) на плотные и в жидкие питательные среды. Инкубацию предпочтительнее проводить при 25 – 30оС, хотя патогенные для человека виды грибов хорошо растут и при 37оС. Достаточных размеров колонии формируются через 48 ч культивирования, хотя точечный рост можно обнаружить уже на следующий день после первичного посева. При отсутствии роста на агаровых средах делают высев с жидких питательных сред на сектора для получения изолированных колоний.

При исследовании мочи наряду с культуральным методом рекомендуется дополнительное исследование, имеющее целью (!) выявление иммуноглобулинов человека на поверхности бластоспор. Для этого около 5 мл второй порции мочи центрифугируют в течение 5-10 мин при 1500 об/мин и из осадка готовят (1) нативные препараты и мазки, окрашенные по Граму, а также (2) препараты для иммунолюминесцентного исследования при котором фиксацию осуществляют метанолом, а после высушивания мазка наносят антисыворотку против глобулинов человека, меченную изотиоцианатом флюоресцеина.

В осадке мочи больных мочекаменной болезнью нередко (около 7% проб) присутствуют клетки золотистого стафилококка (В.Г. Кубась и соавт.), которые за счет наличия у них белка А неспецифически связывают Fc-фрагменты IgG, что может привести к получению ложноположительных результатов реакции иммунолюминесценции. При выявлении грамположительных кокков для блокировки белка А рекомендовано (В.Г. Кубась и соавт.) к осадку мочи добавлять равный объем кроличьего глобулина с концентрацией белка 1,0 мг/мл. После (1) инкубации смеси при 37оС в течение 30 мин и (2) 3-кратного промывания осадка фосфатным буферным раствором (3) готовят мазки и (4) фиксируют их метанолом. Предварительная обработка кроличьим глобулином взвесей золотистых стафилококков (100-500 млн/мл) подавляла их неспецифическую флюоресценцию.

Выявление светящихся дрожжевых клеток при параллельном обнаружении дрожжей в нативном и окрашенном по Граму препаратах свидетельствует о том, что они несут на своей поверхности специфические глобулины, то есть о наличии у пациента тканевых поражений. Положительный антиглобулиновый тест свидетельствует о кандидозном поражении мочевыводящих путей. Контролем для исключения аутофлюоресценции дрожжевых клеток является исследование неокрашенного препарата.

(!) Видовое определение выделенных культур является важным критерием диагностики и имеет комплексный характер, включающий (1) изучение внешнего вида колонии, (2) ферментативной активности и (3) ассимиляционной способности штамма, (4) типа филаментации, а также (5) характера роста в жидкой питательной среде (наличие поверхностной пленки, поднимающееся по стенке пробирки над поверхностью среды кольцо и т.д.). Большинство патогенных для человека видов грибов рода Candida может быть идентифицировано без постановки ассимиляционного теста.

Из-за резкого преобладания C. albicans у больных и миконосителей, у выросшей культуры прежде всего выявляют наличие характерного морфологического признака этого вида – хламидоспоры. С этой целью производят прерывистый штриховой посев на рисовый агар, часть посева покрывают фламбированным покровным стеклом. Посевы инкубируют при 37оС или при 22оС. Подавляющее большинство штаммов C. albicans образуют хламидоспоры через 12-24 ч, реже – через 48 ч. Выявление хламидоспор позволяет идентифицировать культуру как C. albicans и не проводить дальнейших исследований. Культуры, у которых хламидоспоры выявить не удалось, исследуют по комплексу признаков.

При постановке ассимиляционного теста в стерильную чашку Петри вносят 1-2 мл взвеси культуры, которую заливают 18-20 мл базовой среды с добавлением дрожжевого аутолизата, охлажденной до 43-45°. После застывания агара его подсушивают и на поверхность наносят стерильные диски фильтровальной бумаги, пропитанной 20% или насыщенным раствором изучаемого источника питания. Можно также на поверхность агара наносить небольшие количества нерастворенного источника питания. Чашки инкубируют в перевернутом виде при 25-28оС; в положительных случаях в течение 2-4 дней вокруг источника питания обнаруживается рост культуры гриба.

В последнее десятилетие разработан ряд автоматизированных систем для видовой идентификации грибов рода Candida, в основу которых положено определение ассимиляционной способности изучаемых культур. Каждая лунка содержит определенный источник питания, посевы инкубируются при 30оС в течение 24 ч. Помутнение среды свидетельствует об ассимиляции данного источника питания, регистрация результатов производится фотометрически. При помощи компьютера по нумерационно-кодовому принципу осуществляют видовое определение штамма.

Серологическая диагностика. Высокую диагностическую значимость имеет реакция непрямой иммунолюминесценции. У большинства здоровых лиц ее интенсивность составляет 1:10 – 1:20, диагностическим считается титр 1 и более. Для реакции агглютинации частиц латекса, сенсибилизированных соматическими антигенами, диагностическим считают титр 1:8; у больных с выраженной иммуносупрессией диагностическое значение имеет 4-кратное увеличение титра в процессе заболевания. Для поиска антигенов гриба используют частицы латекса, сенсибилизированные антителами, но во избежание ложноположительных результатов, в сыворотке должен отсутствовать ревматоидный фактор.

При использовании встречного иммуноэлектрофореза выявление 2 и более дуг преципитации имеет диагностическую ценность. У здоровых лиц, а также у больных поверхностным кандидозом дуги преципитации, как правило, отсутствуют. При перекрестном иммуноэлектрофорезе у больных висцеральным кандидозом выявляется в среднем 10 дуг преципитации (пределы колебаний – 5-20), при кандидозном эндокардите – около 8 (1-11), а в контрольной группе – 2 (0-5). Специфичность метода увеличивается при использовании промежуточного геля с конкавалином А, который связывает маннан, содержащийся в виде примеси в препаратах соматических антигенов.

Большую ценность, чем титрование антител, имеет определение в сыворотке циркулирующих антигенов гриба, особенно цитоплазматических. Определение антигенов осложняется формированием в сыворотке иммунных комплексов. Полисахаридные антигены высвобождаются из этих комплексов кипячением, для белковых антигенов методы выделения не разработаны. При диссеминированном кандидозе маннан выявляют у 50-70% больных при его отсутствии у здоровых лиц, что придает находке диагностическую значимость. Методом газо-жидкостной хроматографии в сыворотке определяют метаболиты гриба – маннозу и арабинитол. Определение сывороточного содержания арабинитола основывается на способности некоторых видов (C. albicans, C. tropicalis, C. pseudotropicalis, C. parapsilosis) синтезировать это вещество. При почечной недостаточности рекомендуется одновременное определение концентрации арабинитола и креатинина, так как скорость выделения этих веществ одинакова.

Диагностика системного кандидоза. Своевременный диагноз системного кандидоза представляет значительные трудности, поскольку клиническая симптоматика неспецифична. В диагностике кандидоза основная роль принадлежит лабораторным методам исследования: микроскопическим, культуральным, газохроматофическим и молекулярным.

Выявление кандидемии считается наиболее значимым диагностическим маркером гематогенного кандидоза и служит абсолютным показанием к проведению противогрибковой терапии. Следует иметь в виду, что системный кандидоз может не сопровождаться кандидемией. Наиболее важным признаком диссеминированного кандидоза является грибковый эндофтальмит (экссудативные изменения желто-белого цвета сосудистой оболочки глаза). Поэтому офтальмологическое обследование считается весьма значимым в комплексе диагностики и мониторинга больных, имеющих факторы риска диссеминированной кандидозной инфекции. Однако кандидозный эндофтальмит не является начальным признаком генерализации грибковой инфекции, даже у больных с кандидемией поражение сетчатой оболочки выявляют лишь в 9-15% случаев. Другие проявления диссеминированного кандидоза (в частности, поражения кожи и артрит) отмечаются крайне редко у больных в ОИТ. После операций, не затрагивающих почки, мочевой пузырь, а также в тех случаях, когда не было длительной катетеризации мочевого пузыря, кандидурия с выделением большого числа КОЕ является весьма подозрительным симптомом гематогенного поражения почек.

Серологические методы включают определение антител к Candida spp. с помощью различных методов: (1) агглютинации, (2) иммуноэлектрофореза и (3) иммунодилюции. К сожалению, интерпретация получаемых данных часто затруднительна, поскольку антитела обнаруживаются и у здоровых людей, и в случаях обычной колонизации. Более того, эти методы дают отрицательный результат при грибковой инфекции у больных с иммунодефицитными состояниями и в начальной стадии системного кандидоза. Большей информативностью обладают серологические методы определения антигенов Candida spp., однако они также обладают лишь умеренной чувствительностью в случаях системного кандидоза.

Перспективным методом диагностики является хроматографическое определение метаболитов грибов – D-арабинитола в различных биологических жидкостях и тканях инфицированных больных. Большинство патогенных Candida spp. (кроме С. crusei и C. glabrata) продуцируют значительное количество D-изомера арабинитола, и в сыворотке больных при инвазивном кандидозе определяется его повышенное содержание, а также повышение отношения D-арабинитол/креатинин. В проспективных клинических исследованиях подтверждена значимость серийных определений D-арабинитола для диагностики кандидоза у онкологических больных с нейтропенией. Однако инвазивный кандидоз во многих случаях протекает без кандидемии, что не может не отражаться на содержании D-арабинитола в крови и снижает диагностическую ценность метода.

Диагностика кандидоза осуществляется несколькими лабораторными методами:

• микроскопическое и культуральное исследования (посев);
• иммуноферментный анализ;
• полимеразная цепная реакция.

Каждый из методов обладает своими особенностями и позволяет выявить болезнетворные микроорганизмы, которые провоцируют развитие кандидоза, или молочницы. Окончательный диагноз устанавливается только после того, как собран биоматериал и сданы все допустимые лабораторные анализы на кандидозы, а также получена расшифровка с положительными результатами по каждому пройденному виду клинического исследования.

Как диагностировать молочницу правильно, и какие методы используются при этом?

Общие положения диагностики кандидоза

Для того чтобы получить достоверный диагноз и определить какие анализы сдают при молочнице, необходимо учитывать следующие положения, которые являются ключевыми при проведении диагностических тестов:

1. Диагностика включает обязательное дифференцирование носителей инфекции от непосредственно страдающих этим заболеванием пациентов. Известно, что около 25% всего населения являются носителями кандидозных грибов в полости рта, кишечнике и детрите. Кандиду относят к условно-патогенным микроорганизмам, поэтому она всегда присутствует даже в нормальной микрофлоре человеческого организма.
2. Важно учитывать количество полученного биологического материала для исследования, поэтому в ряде случаев необходимы повторный забор биожидкостей и биопсия слизистых оболочек.
3. Если клетки кандиды проявляются случайно, то рекомендуется пройти полное обследование. Это связано с тем, что простая молочница может стать предвестником таких серьезных заболеваний, как СПИД, сахарный диабет и рак крови. В некоторых случаях поражаются внутренние органы.
4. Во время проведения лабораторных анализов необходимо стремиться повысить чувствительность кандиды к антимикотическим препаратам. Кроме того, важно правильно идентифицировать виды грибов и их численность.
5. Молочница полностью не исключает наличие возможных сопутствующих заболеваний. Возможно, что наряду с кандидозным поражением имеются туберкулезные, онкологические, аутоиммунные, аллергические и другие патологии.

Важен тот факт, что при диагностике некоторых инфекционных заболеваний необходимо обращать внимание на наличие псевдомицелия у кандиды, так как только вид Candida Albicans способен его образовывать. Но другие формы гриба, которые его не имеют, тоже могут присутствовать в лабораторном образце биологической жидкости.

Если при микроскопии Albicans не выявлена, то необходимо провести дополнительные исследования, которые смогут идентифицировать другие формы гриба, вследствие чего диагностируется молочница. В частности, лучшие результаты дает метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Если имеет место орофарингеальная молочница, то необходимо учитывать наличие местных факторов риска:

• съемные зубные протезы;
• соски-пустышки;
• наличие красного плоского лишая;
• частое применение ингаляций с кортикостероидными препаратами.

Все это может вызывать дискомфорт в слизистой полости рта и жжение. Чаще всего наблюдаются фибринозные и атрофические изменения во рту.

Согласно стандарту диагностики кандидоза, в данном случае проводится цитологическое исследование образца биожидкости из полости рта. Если выявилось наличие псевдомицелия кандиды, то подтверждают предполагаемый диагноз.

При поражении грибом пищевода и желудка в качестве местных факторов риска рассматривают наличие ожогов, полипоза, дивертикулеза. Часто молочница развивается на фоне предшествующего оперативного вмешательства в ткани пищевода. В желудке может быть обнаружен эрозивный гастрит. Для проведения диагностики берется мазок-отпечаток слизистой оболочки желудка.

Кандидоз кишечника проявляется в виде абдоминальной боли; в стуле обнаруживают кровь и слизь. Также одновременно развивается системный кандидоз. Если имеет место кандидоз неинвазивный, то часто его сопровождают другие патологические бактерии (стафилококк, морганелла).

Микроскопическое исследование необходимо проводить в тех случаях, когда имеются явные признаки и симптомы развития инфекционного или воспалительного заболевания. Благодаря этому методу имеется возможность как выявить молочницу, так и определить настоящую этиологию патологического процесса. Клетки дрожжевого гриба кандиды легко обнаруживаются в биожидкости.

Посев на культуры рекомендуется проводить, когда молочница принимает рецидивирующий характер и длится достаточно долгий период времени. Важно проводить анализы на кандидозы, если их микроскопические формы и другие потенциальные возбудители заболевания не были обнаружены. Если проводилась антимикотическая терапия, то культуральный анализ показан в обязательном порядке. Он идентифицирует виды патологических микроорганизмов и помогает проявиться чувствительности к лекарственным препаратам антимикотического действия.

Кандиды питаются остатками тканей отмерших микроорганизмов. Они могут находиться на поверхности тела, коже и слизистых оболочках. Это говорит о том, что если во время диагностики обнаружены только ДНК кандиды, то этой информации для диагностики недостаточно. Какие анализы сдавать при молочнице, укажет лечащий врач во время осмотра, исходя из имеющихся жалоб и характерных клинических симптомов.

Микроскопическая диагностика

Хорошие результаты дает метод ПЦР (полимеразная цепная реакция), но для диагностики кандидоза его возможностей недостаточно. Рассмотрим микроскопические методы анализа более детально:

1. Микроскопия мазка. Благодаря ему проводится сравнительная характеристика бластоспор и псевдомицелия кандиды. Анализ на молочницу проводят с помощью фиксированных и нативных препаратов, которые окрашены по Граму, или в синий метиленовый. Именно обнаружение псевдомицелия говорит о том, что имеет место развитие инфекционного заболевания. Единственный недостаток микроскопии — это возможные визуальные ошибки при идентификации определенных видов бактерий. Диагностическая чувствительность этого метода тоже достаточно низкая и составляет максимально 40%. Для повышения чувствительности псевдомицелий клеток обрабатывают специальными красящими веществами. Благодаря контрастности проявляться под микроскопом они будут легко, отличаясь от других форм кандиды. Этот способ уже повышает чувствительность метода до 80%.
2. Бактериальный посев (культуральная диагностика). Благодаря этому методу исследования врачи имеют возможность не только выявить самого возбудителя инфекционного заболевания, но и определить его количественное соотношение. Успешно определяется и чувствительность кандидозных грибов к антимикотическим лекарственным препаратам. Важную роль в этом анализе играет предварительная подготовка, так как от количества бактерий в биологическом образце будет зависеть результат исследования. Диагностика молочницы занимает до 7 дней. Посев осуществляют в специальные плотные питательные среды. Чувствительность этого диагностического метода очень высока и достигает 95%. Микробиологическая диагностика кандидоза имеет свои недостатки — это высокая стоимость в некоторых клинических случаях и возможные проблемы при транспортировке биоматериала.

Диагностика кандидоза методом ИФА и ПЦР

ИФА, или иммуноферментный анализ, позволяет распознать большой спектр возбудителей различных заболеваний. Он основан на способности человеческого организма вырабатывать антитела в качестве ответной реакции на появление антигенов (чужеродных веществ в сыворотке крови).

Тест состоит из двух частей: иммунной и ферментной реакций. Обе являются взаимозависимыми, так как иммунная реакция выявляет количество патологических клеток, позволяет определить их вид и связать их воедино, а ферментная — помогает визуализировать полученный результат.

Благодаря тому, что организм человека вырабатывает антитела, метод ИФА осуществляется за счет их образования. 5 видов белковых структур участвуют в выявлении инфекции:

Для диагностики определенного заболевания берут только 1 вид антител, который выявляется наиболее чувствительным к антигенам возбудителя.

Суть ферментативной реакции заключается в том, что благодаря особым ферментам имеется возможность превратить весь исследуемый материал (субстрат) в другое вещество (продукт реакции). Причем во время воздействия фермента есть только 1 реакция, а воздействие конкретного фермента возможно только на конкретный субстрат. Таким образом, происходит узнавание или родство материалов.

Преимущество метода ИФА заключается в том, что он позволяет не только выявить наличие возбудителя и диагностировать заболевание, но и определить степень его развития. Например, с помощью данной методики можно определить хроническую или острую стадии патологии.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) напрямую способна обнаруживать возбудителя инфекционного заболевания, причем чувствительность этого анализа составляет 90%. Особенно важно то, что он позволяет дифференцировать грибы кандида с псевдомицелием от тех, что его не имеют. Это принципиально важно для последующей интерпретации результатов и диагностики.

Как интерпретируют полученные результаты?

Если во время проведения одного или нескольких лабораторных исследований были обнаружены бластоспоры и псевдомицелий грибов кандиды, то это является явным диагностическим признаком воспалительного заболевания кандидоза. Диагностика молочницы, таким образом, упрощается.

Если получен отрицательный результат во время микроскопического исследования, то это еще не значит, что молочница отсутствует. Важно провести дополнительные лабораторные тесты с помощью других диагностических методов. Это позволит выявить возбудителей заболевания, особенно если оно протекает в хронической рецидивирующей форме.

Если были обнаружены дрожжеподобные грибы Кандида в биоматериале пациентов с клинической симптоматикой, и при этом имеются явные признаки инфекционного заболевания, но возбудители инфекции, передающейся половым путем, отсутствуют, то можно говорить о достоверности диагноза кандидоз; диагностика, однако, может быть затруднена, если инфекция вызвана грибами non-albicans (псевдомицелий отсутствует), поэтому возможен отрицательный результат при исследовании методом ПЦР. Это связано с тем, что его реагенты направлены на выявление только ДНК кандиды. Важно учитывать, что наличие ее ДНК в сыворотке крови тоже не является основанием для постановки диагноза кандидозной инфекции, если клинические и лабораторные признаки инфекции отсутствуют.